琼脂糖微球-重组耐碱蛋白A亲和填料的产品特点

1 、产品介绍

 NuPerley rat-PA是一款抗体亲和填料，其配基rat-PA为重组耐碱蛋白A（Recombinant Alkali-tolerant Protein A，rat-PA），NuPerley基球是新一代高刚性琼脂糖微球。

重组耐碱蛋白A配基由大肠杆菌表达，不含动物来源，该配基通过多点偶联的方式与基球偶联，减少了配基掉落，通常情况下相对于抗体的配基掉落量可控制在5~10ppm以内。加之基因工程改造，其对人IgG的动态结合载量稳定在45mg/mL，可耐受0.1~0.5M浓度的NaOH溶液清洗和去除热源。相较于ProANUPharoseFF，本产品保持了对人、小鼠、大鼠、兔、牛等等来源的多种类型和亚型的抗体有亲和作用，可从腹水、血清、细胞培养上清或细胞抽提物中分离和纯化多种哺乳动物不同亚型的抗体或包含抗体Fc片段的基因工程重组蛋白，可满足不同规模的研究或生产严格的清洁要求。

2 、产品特点与技术指标

产品名称    琼脂糖微球-重组耐碱蛋白A亲和填料

基质    高刚性琼脂糖微球

配基    重组耐碱蛋白A ， ≥10mg/mL

粒径范围 a    30~100 μm

平均粒径    ~60 μm

动态结合载量 b    ≥45 mg h-IgG/mL

推荐工作流速 c    60~300 cm/h

最大流速与压力 d    >1500 cm/h

使用 pH    3~10（推荐的工作 pH），3~12（短期稳定）

化学稳定性    在以下溶液中稳定：常用的水相缓冲液、0.1~0.5 mol/L 氢氧 化钠、6 mol/L 盐酸胍、70%乙醇等。

储存与运输    20%乙醇，2~8 ℃保存，2~30 ℃运输

注：a90%体积以上的微球在此粒径范围；bDBC10%测试条件为：10%流穿，6 min 停留时间；c 推 荐流速是指该流速可满足大部分柱高下 2~6 min 停留时间的使用条件，并非只能在该流速范围 内工作；d 10 cm 柱高下的最大测试流速。

使用方法参考

 3.1  色谱柱装填

以下阐述与层析系统连接时，填料的色谱柱装填方法。

（1）所有需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体最好做脱气处理。

（2）填料用量计算：通过沉降定量填料体积，需要的沉降填料体积=柱体积×压缩比（也称压缩因子）。沉降体积是指填料在20%乙醇保存液中自然沉降完全读取的稳定体积。NuPerley rat-PA的压缩比为1.10。为使达到装柱比，可通过柱头下压的方法，也可以通过高流速压柱。

（3）填料清洗：将填料悬液充分摇匀后量取相应体积，抽滤除去液体，并用约3倍填料体积的纯化水洗涤，重复3次，以除去保存液。

（4）装柱填料悬液准备：将填料转移到适当的容器中，加入适量的装柱液，制成50~75 v%的装柱填料悬液，使用前搅匀。

（5）装填前准备：在清洗干净的层析柱下端加入装柱液，以除去下垫片及层析柱下端的空气，在柱内保留少量的蒸馏水，拧紧下堵头，调整柱子使其垂直于地面。

（6）装填：将搅匀后的填料悬液一次性缓慢倒入层析柱内（必要时使用装柱器），为避免引入气泡，应使之沿层析柱内壁自然流下。将所有填料加入后，用装柱液将装柱器加满，拧紧装柱器上盖，将柱子与层析系统连接。

（7）压柱：使柱内填料自然沉降（或 50~150 cm/h 的低流速下沉降），待填料沉降完全后（填料与液体的界面清晰），去除装柱器，装上上柱头，并将柱头下降至界面处；通过高流速（推荐流速见下表，注意柱压不超过0.3MPa），继续压柱至界面清晰稳定，标记界面稳定时的柱高。停泵，打开柱头上的阀门/堵头，关闭柱底的阀门/堵头，下压柱头至标记位置下方与压缩比对应的位置，旋紧柱头，装柱完成。装柱完成后，需用高流速平衡柱内的填料。