染色体步移试剂盒实验时哪一步关键！

产品说明：

染色体步移技术（Genome Walking）是一种重要的分子生物学研究技术，使用这种技术可以有效获取与已知序列相邻的未知序列。染色体步移技术主要有以下几方面的应用：  

1.根据已知的基因或分子标记连续步移，获取人、动物和植物的重要调控基因，可以用于研究结构基因的表达调控。如分离克隆启动子并对其功能进行研究；

2.步查获取新物种中基因的非保守区域，从而获得完整的基因序列；

3.鉴定T-DNA或转座子的插入位点，鉴定基因枪转基因法等转基因技术所导致的外源基因的插入位点等；

4.用于染色体测序工作中的空隙填补，获得完整的基因组序列；

5.用于人工染色体PAC、YAC和BAC的片段搭接。

本试剂盒是一种根据已知基因组 DNA 序列，获取侧翼未知序列的试剂盒。相对于其它传统方法，本试剂盒具有、简便、特异性高、灵敏度高、一次性获得的未知序列较长等特点。其主要原理是根据已知DNA序列，分别设计三条同向且退火温度较高的特异性引物（SP Primer），与试剂盒中提供的四种经过*设计的退火温度较低的兼并引物，即 ZFP1、ZFP2、ZFP3、ZFP4、ZFP5、ZFP6、ZFP7、ZFP8、ZFP9进行热不对称 PCR 反应。

通常情况下，其中随机选四种至少有一种兼并引物可以与特异性引物之间利用退火温度的差异进行热不对称 PCR 反应，通过三次巢式PCR 反应即可获取已知序列的侧翼序列。如果一次实验获取的长度不能满足实验要求时，还可以根据次步移获取的序列信息，继续进行侧翼序列获取。此外，本试剂盒中还含有 Control DNA 及 Control Primer，可以方便进行 Control 实验。

产品特点：

★配备9对随即引物，一次性获得的未知序列，结果真实性达9999%。

★高扩增性： 扩增成功率、产物特异性、产量均有显著提高。  

★长片段扩增性： 长步移可达3.2kb，通常情况下，一次可步移1.5 kb左右；而T公司的染色体步移试剂盒只能步移200-500bp。

★提高工作效率：巧妙引物设计（免去了酶切和加接头等繁琐的实验步骤）, 12小时即可完成PCR扩增到转化克隆的全过程。干一天的工作等于以往三天的工作量。

染色体步移试剂盒实验时哪一步关键！