常见免疫组化染色的两种方法。南京信帆生物代做免疫组化实验，咨询！

免疫组化双染色法。

1.切片脱蜡至水。

2.0.3%H2O2甲醇处理切片10分钟。

3.水洗。

4.抗原修复。

5.PBS洗3次，每次1分钟。

6.加入非免疫性动物血清，孵育10分钟。

7.PBS洗3次，每次2分钟。

8.加入*抗体孵育60分钟。

9.PBS洗3次，每次2分钟。

10.加入生物素化的第二抗体，孵育10分钟。

11.PBS洗3次，每次2分钟。

12.加入链卵蛋白素过氧化物酶孵育10分钟。

13.PBS洗3次，每次2分钟。

14.加入DAB-H2O2孵育5-10分钟。

15.PBS洗3次，每次2分钟。

16. 加入双染增强液，孵育10分钟。

17. 加入非免疫性动物血清孵育10分钟。

18. PBS洗3次，每次2分钟。

19. 加入选用的第二种抗体孵育60分钟。

20. PBS洗3次，每次2分钟。

21. 加入生物素标记的第二抗体孵育10分钟。

22. PBS洗3次，每次2 分钟。

23. 加入链卵蛋白素碱性酶孵育10分钟。

24. PBS洗3次，每次2分钟。

25. 加入AEC溶液，孵育5-10分钟。

26. 自来水洗。

27. 苏木素染核5-10分钟。

28. 水性封片。

注：1.*种复合物也可先用链卵蛋白素碱性酶。

2.第1次显色也可用BCIP/NBT溶液，颜色为蓝黑色，但应与苏木素鉴别。

免疫组化的双染色法(ⅱ) (Immuno-histochemistry double staining method)

1.切片脱蜡至水。

2.0.3%H2O2甲醇处理切片10分钟。

3.水洗。

4.抗原修复。

5.PBS洗3次，每次1分钟。

6.加入选用的*抗体孵育30-60分钟。

7.PBS洗3次，每次2分钟。

8.加入增强剂孵育20-30分钟。

9.PBS洗3次，每次2分钟。

10.加入酶标抗兔/鼠，复合物，孵育

11.PBS洗3次，每次2分钟。

12.加入DAB-H2O2孵育5-10分钟

13.PBS洗3次，每次2分钟。

14.加入选用的第二种抗体孵育60分钟。

15.PBS洗3次，每次2分钟。

16. 加入增强剂孵育20-30分钟。

17. PBS洗3次，每次2分钟。

18. 加入酶标抗兔/鼠碱性酶复合物孵育20-30分钟。

19.PBS洗3次，每次2分钟。

20.加入AEC溶液孵育5-10分钟。

21.自来水洗。

22.苏木素染核5-10分钟。

23.水性封片。