谷丙转氨酶（ ALT/GPT ）测试盒的测定原理

（ 微板法）

一、测定原理：

谷丙转氨酶（ ALT ）在 37 ℃及 PH7.4 条件下，作用于丙

氨酸及 α- 酮戊二酸组成的底物，生成丙酮酸及谷氨酸。反应

30min 后（固定时间）加入 2,4- 二硝基苯肼（ DNPH ）盐酸溶

液，既中止反应，同时 DNPH 与酮酸中羰基加成，生成丙酮

酸苯腙。苯腙在碱性条件下呈红棕色，于 505nm 比读吸光度

并计算酶活力。

二、试剂的组成与配制： (96T)

试剂一 : 谷丙转氨酶基质液 ,5mL×1 瓶， 4 ℃冰箱保存 6 个月；

试剂二 : 2,4— 二硝基苯肼液 ,5mL×1 瓶， 4 ℃冰箱保存 6 个月；

试剂三 : 4mol/L 氢氧化钠液 ,5mL×1 瓶，室温密封保存 6 个月；

0.4mol/L 氢氧化钠液 的配制 , 临用时按 4mol/L 氢氧化钠液 : 双

蒸水 =1 ∶ 9 的比例稀释，需多少配多少，室温密封保存。

试剂四 : 2 m mol/mL 丙酮酸钠标准液 ×1 支， 4 ℃冰箱保存 6 个月；

试剂五 : 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液 ×1 支， 4 ℃冰箱保存 6 个月。

三、操作过程：

1 、样本前处理 :

①、血清（浆）及其它液体样本待测： 直接测定。

②、动物组织样本： 准确称取组织重量，按重量（ g ）：体积

(mL)=1:9 的比例，加入 9 倍体积的生理盐水，冰水浴条件

下机械匀浆， 2500 转 / 分，离心 10 分钟，取上清液待测。

③、培养细胞样本前处理： 将收集好的细胞用等渗缓冲液（推

荐 0.1mol/L pH7 ～ 7.4 磷酸盐缓冲液或生理盐水）清洗 1 ～

2 次； 1000 转 / 分 , 离心 10 分钟 , 弃上清 , 留细胞沉淀，加入匀

浆介质（推荐加入 0.1mol/L pH7 ～ 7.4 磷酸盐缓冲液或生

理盐水），冰水浴条件下超声破碎或手动匀浆，制备好的

匀浆液不离心，待测。

2 、操作表 :

1 、 比色法中常用的有赖氏（ Reitman-Frankel ）法及金氏（ King ）

法。赖氏法标准曲线所定单位数，是用实验方法和卡门氏分

光

光度法（速率法）作对比测定求得的。以卡门氏单位报

告结果，比较准确。

卡门氏单位定义 ： 1mL 液体，反应液总容量 3mL ，波长 340nm ，

1cm 光径， 25 ℃， 1min 内所生成的丙酮酸，使 NADH 氧化

成 NAD + 而引起吸光度每下降 0.001 为一个单位（ 1 卡门氏

单位 =0.482 U/L ， 25 ℃）。

2 、 一般血清标本内源性酮酸很少，血清对照孔吸光度值接近试

剂空白孔（以双蒸水代替血清，其他和对照孔同样操作）。

所以，成批标本测定时，一般不需要每一标本都作本身血清

对照孔，以试剂空白孔代替即可，但对脂血、黄疸或溶血血

清，每份标本应作对照孔。

3 、 酶活力超过 150 卡门氏单位时，用生理盐水稀释血清后重测。

4 、 应将一般血清的对照孔（或称标本空白孔）的吸光度作为日

常质控的指标之一；如相差大，可考虑 α- 酮戊二酸浓度、 DNPH

浓度及仪器等原因引起。

5 、 血清中 ALT 在室温（ 25 ℃）可保存 2 天，在 0 ～ 4 ℃可保存一

周，在 -25 ℃可保存 1 个月。

附录 Ⅰ： ALT 标准曲线

1 、操作表 :

附录 Ⅱ：组织中 ALT 测定

1 、样本前处理：

准确称取组织重量 , 按重量 (g): 体积 (mL)=1:9 的比例 , 加入 9 倍体

积的生理盐水 , 冰水浴条件下机械匀浆 , 制成 10% 的组织匀浆 ,2500

转 / 分 , 离心 10 分钟 , 取上清液 , 再用生理盐水稀释到适宜浓度 ( 通过标

准曲线后计算得匀浆液卡门氏单位值小于 150) 待测。 ( 取部分上清

液测蛋白浓度 , 蛋白定量试剂盒本所有售 )

2 、操作表：

组织中活力 = 通过标准曲线得 ¸ 待测匀浆液蛋白

匀浆液 ALT活力 浓度

附录 Ⅲ：血清（浆）中 ALT 测定

1 、前处理：

血清 ( 浆 ) 直接取样进行测定。（若酶活力超过 150 卡门氏单位

时，需用生理盐水稀释血清后重新测定）

2 、操作表：

谷丙转氨酶（ ALT/GPT ）测试盒的测定原理