线粒体提取检测试剂盒-血液样本

本试剂盒可用于从血液中分离完整而纯化的线粒体。其制备物，可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。但不适用于进一步DNA 提取。

样本处理的方法

1. 血液处理：

血液要求：非肝-素钠抗凝血，最好使用新鲜血液。对于陈旧血液，由于冻凝过程中冰晶已经对细胞核膜和线粒体膜产生损伤，所以线粒体得率会大大减少，并且完整性也会降低。

a. 对于无核红细胞全血（如哺乳动物处周血），取血约5ml（适当分成几管），加入3 倍体积的红细胞裂解液（稀释后的工作液,下同），混匀，800 × g 5 min 离心收集白细胞。加入1-2ml 红细胞裂解液（稀释后的工作液），吹打重悬白细胞，合并于一管中，800 × g 5~10 min 离心收集白细胞。此时如果白细胞有可见红色，可再次用少量(0.5ml)红细胞裂解液洗细一次。

b. 对于有核红细胞全血（如禽类全血），取约200-300ul 全血，800 × g 5~10 min 离心收集全细胞，用生理盐水或者PBS 清洗两次，留沉淀去上清。清洗时请用去尖吸头吹打。

2. 在收集到的细胞中，加入1.0 mL 冰预冷的白细胞裂解液重悬细胞，将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内，0℃冰浴研磨20~40 次；

3. 匀浆物转移到离心管，4℃，1000× g 离心5 min；

4. 取上清，加入一新的离心管中，4℃，1000× g 再次离心5 min（一共两次离心，完整去核）。

5．取上清，加入一新的离心管中，4℃， 12,000 × g 离心10 min。离心后的上清含胞浆成分，可从中提取胞浆蛋白。将上清转移到新离心管，线粒体沉淀在管底；

6. 在线粒体沉淀中加入0.5 mL 线粒体清洗液重悬线粒体沉淀，4℃，1000× g 离心5 min(再次去核）；

7．取上清，加入一新的离心管中，4℃， 12,000 × g 离心10 min。弃上清，高纯度的线粒体沉淀在管

底；

8. 用50 -100μL 线粒体保存液或合适的反应缓冲液重悬线粒体沉淀，立即使用或-70℃保存。

注意事项

为保证获得完整及尽可能多的线粒体，匀浆条件要示：第一是全程低温操作。第二是快速。第三，如有条件可将匀浆后的碎片在显微镜下观察。